Apoptose

Apoptosis + Necrosis.
Human intermediate filament protein cytokeratin 18 (K18).
Released from human epithelial cells.

Sérum ou Plasma humains (EDTA, Citrate, Héparine).
Pour un même projet, il est nécessaire d’utiliser le même type de milieu  (sérum ou plasma).
Plasma de rat ou de souris pour mesurer des xénogreffes humaines.
Surnageant de cultures provenant de cellules ou de tissus (épithéliaux)  positifs pour le  K18.

On peut conserver les sérums 2 jours à 2 – 8°C ou au minimum 9 mois
à – 20°C et 2 ans à -80°C.
Plusieurs cycles de congélations/décongélations sont possibles.

Valeur médiane : 264 U/l (fourchette comprise entre 136 et 480 U/l)
95th percentile : 413 U/l
On a dosé la K18 soluble totale (Kératine 18 clivée et non clivée exprimée par la totalité des cellules mortes, nécrotiques et apoptotiques) chez
200 donneurs de sang suédois apparemment normaux. On a observé une distribution similaire chez l’homme et la femme, indépendante de l’âge. On en a déduit que le cut-off pour une valeur de K18 élevée était > 450 U/l.

Homme, Primates, Bovins

Le dosage utilise 2 anticorps monoclonaux dirigés contre les épitopes de la région 284-396 de la protéine K18. Le dosage détectera la totalité de la protéine soluble K18 ainsi que les fragments de K18 et les complexes protéiques qui possèdent cet épitope.

Le Standard contenu dans le kit contient du matériel recombinant qui n’est pas comparable au fragment mesuré dans l’échantillon. Il n’est donc pas adapté à un test de surcharge. La récupération du fragment protéique de la protéine recombinante K18 observée dans le sérum ou le plasma humain sera supérieure à la valeur attendue.

Lorsqu’on dilue au ½ du sérum humain à l’aide de Standard A (0 U/l) on observe une récupération moyenne égale à 126% (fourchette comprise entre 116 et 139%).
En diluant entre 1/1 et 1/10 à l’aide du Diluant pour échantillon M65, on observe une récupération moyenne égale à 106% (fourchette comprise entre 100 et 117%).).

On n’observe pas d’’effet crochet  jusqu’à 70 000 U/l.

Ce dosage permet la mesure de la kératine18 (K18) soluble totale exprimée par les cellules mortes (nécrotiques et apoptotiques). Les cellules ou les tissus doivent être d’origine épithéliale (par ex : rein, intestin, colon, poumon ou foie) et exprimer la K18.

On peut combiner le M65 ® ELISA avec le M30 Apoptosense® ELISA (Peviva Réf : 10010) pour déterminer le mode de mort cellulaire (Apoptose ou Nécrose). Ce mode peut être déterminé in vitro et dans le sérum de patients cancéreux (Kramer et al, Cancer Res. 2004).